可的松 ELISA 試劑盒（化學(xué)發(fā)光）

1. 檢測原理

本試劑盒采用**競爭性化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）**定量檢測血清、血漿、唾液或尿液中的可的松含量。

• 包被抗原：微孔板預(yù)包被可的松-蛋白結(jié)合物

• 競爭反應(yīng)：

  • 樣本中的可的松與堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記的可的松競爭結(jié)合有限量的抗可的松抗體

  • 形成"抗體-抗原-ALP"復(fù)合物

• 信號檢測：

  • 加入化學(xué)發(fā)光底物（CDP-Star®）

  • ALP催化底物產(chǎn)生光信號

  • 發(fā)光強(qiáng)度與可的松濃度成反比

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2. 主要特點(diǎn)

• 超高靈敏度：檢測下限可達(dá)0.05 ng/mL

• 寬檢測范圍：0.1-100 ng/mL

• 優(yōu)異特異性：與皮質(zhì)醇交叉反應(yīng)＜0.5%

• 全自動兼容：適用于主流化學(xué)發(fā)光分析儀

• 多種樣本兼容：血清、血漿、唾液、尿液等

3. 試劑盒組成

4. 樣本處理

• 血清/血漿：

  • 采集后立即離心（3000g，10min）

  • 2-8℃可保存72小時，-20℃長期保存

• 唾液：

  • 使用專用唾液采集管

  • 離心（10000g，5min）去除粘蛋白

• 尿液：

  • 收集24小時尿，調(diào)pH至7.0

  • 離心后取上清檢測

5. 檢測步驟

1. 加樣：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本25μL + 抗體50μL

2. 孵育：37℃震蕩孵育45min

3. 洗滌：自動洗板機(jī)洗板5次

4. 加酶：每孔加入ALP標(biāo)記物50μL

5. 孵育：37℃30min

6. 洗滌：洗板5次

7. 顯色：加入底物100μL

8. 檢測：化學(xué)發(fā)光儀讀數(shù)（延遲1s，積分3s）

6. 結(jié)果計算

• 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（4參數(shù)logistic擬合）

• 計算樣本濃度（ng/mL）

• 尿液結(jié)果建議用肌酐校正（μg/g Cr）

7. 性能參數(shù)

• 靈敏度：0.05 ng/mL

• 線性范圍：0.1-100 ng/mL

• 批內(nèi)變異：＜7%

• 批間變異：＜10%

• 回收率：92-108%

8. 注意事項

1. 避免反復(fù)凍融標(biāo)準(zhǔn)品和樣本

2. 不同批次試劑不可混用

3. 化學(xué)發(fā)光底物需現(xiàn)配現(xiàn)用

4. 建議使用非接觸式分液系統(tǒng)

5. 嚴(yán)格控制在37±1℃孵育

9. 儲存條件

• 未開封試劑盒：2-8℃保存，有效期18個月

• 開封后：微孔板需干燥保存，4周內(nèi)使用

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10. 應(yīng)用領(lǐng)域

• 11β-HSD2酶活性評估

• 鹽皮質(zhì)激素相關(guān)疾病研究

• 高血壓發(fā)病機(jī)制研究

• 糖皮質(zhì)激素代謝監(jiān)測